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作者:李根英等 来源:《植物生物技术杂志》 发布时间:2021/6/23 9:24:48
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明升体育app家精准编辑4个小麦品质基因

 

近日,山东省农业明升体育app院作物研究所研究员李根英领衔的小麦分子育种创新团队在《植物生物技术杂志》发表研究论文。该研究选取了与小麦加工品质密切相关的4个基因(籽粒硬度基因pinb、淀粉品质基因waxy、面粉色泽基因psy和面团褐变基因ppo),利用农杆菌介导的CRISPR/Cas9系统对其进行精准打靶,经过多代纯合和鉴定,获得不含外源转基因成分的基因编辑新种质,为小麦品质育种提供了新的基因资源。

小麦为世界60%以上人口提供大量的碳水化合物和蛋白质。随着经济的持续发展,人们对面制品加工品质要求越来越高,优质专用小麦品种的需求越来越大。籽粒品质与加工品质密切相关,是多基因共同作用的结果。培育突破性的优质小麦品种,需要突破性的基因资源,然而自然界已经发现的优异等位基因远远不能满足育种者的需求。基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术的出现,为小麦提供了快速、准确地创造更多新等位基因变异机会。

籽粒硬度是面包小麦的重要指标,也是国际小麦分级的依据,它与面粉吸水率密切相关。Pinb基因是位于染色体5DS上的单拷贝基因,是决定籽粒硬度关键基因之一,其缺失或突变都会导致籽粒质地变硬。该研究在pinb基因编码区设计了靶向sgRNA,进行小麦遗传转化。在T0植株中未检测到突变,但在T1株系中出现了34bp的缺失突变,编辑比例6.82%~38.72%,野生型比例较大。T2代编辑效率进一步提高,最高编辑比例达92.26%,在T3代达到了纯合。受体品种fielder的SKCS指数由18.2提高到73.4,大大提高其籽粒硬度,一步将软质小麦变成了硬质小麦。该突变在编码区发生了34bp的缺失,是迄今为止在普通小麦pinb基因第一个大片段缺失材料,拓宽了小麦籽粒硬度改良的遗传资源。

籽粒淀粉组分对小麦面制品尤其是面条品质有重要影响。Waxy是小麦胚乳直链淀粉合成的关键酶,分别由位于7A、4A和7D染色体上的Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1编码。为了获得新的waxy基因资源,研究人员设计了一个靶向waxy基因第二外显子的sgRNA。序列扩增和分析证实受体材料fielder属于Wx-B1缺失类型。突变体waxy-2在A和D基因组中均发现1-bp的缺失,导致翻译提前终止,该突变可以稳定遗传,并未产生新的突变类型,在T2代达到纯合。碘染色实验表明,对照籽粒横截面中的胚乳变为深蓝色,而waxy-2变为红棕色,这是糯小麦的典型特征。上述结果表明,研究人员成功地对waxy基因进行了编辑,获得了新的等位基因,大大降低直链淀粉含量,将非糯小麦一步转化为糯小麦。

多酚氧化酶(PPO)活性和黄色素含量(YPC)是决定面制品颜色的两个重要参数。多酚氧化酶容易造成面团褐变,影响面制品的外观。因此,培育低PPO活性小麦品种一直是小麦育种的重要目标。研究人员设计了一个同时靶向小麦A、B和D基因组编码区的sgRNA,突变体ppo-7在A、B和D基因组都检测到同一类型的2-bp缺失,并且在T3代出现纯合,其籽粒PPO活性为1.24U?g-1min-1,比受体fielder籽粒PPO活性(9.0U?g-1min-1)显著降低,突变体中ppo基因的编辑比例与PPO活性呈负相关。八氢番茄红素合酶(PSY)是催化类胡萝卜素生物合成的一个重要步骤,通常被认为是该途径中最重要的调节酶。研究人员设计了一个sgRNA靶向PSY-7A、7B和7D的编码区。选择在A、B和D基因组上都有“T”插入的突变体psy-13用于后续研究。突变体编辑比例与YPC含量呈负相关,T2植株的编辑比例为46.29%~71.53%,YPC含量为2.33mg/kg,T3纯合突变体的平均值为1.68mg/kg,显著低于WT(2.81mg/kg)。

综上,该研究选取了与小麦籽粒硬度、淀粉品质和面团颜色相关的pinb、waxy、ppo和psy等4个籽粒品质相关基因,利用农杆菌介导的CRISPR/Cas9系统对其进行精准打靶,获得了具有新优异等位基因的小麦新种质。(来源:明升官网明升体育app报 王方)

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