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论文标题：A Novel Effective and Safe Vaccine for Prevention of Marek’s Disease Caused by Infection with a Very Virulent Plus (vv+) Marek’s Disease Virus（一种新型有效且安全的疫苗，用于预防由强毒力 Plus (vv+) 马立克氏病病毒感染引起的马立克氏病）

期刊：Vaccines

作者：Yifei Liao, Sanjay M. Reddy, Owais A. Khan, Aijun Sun and Blanca Lupiani

发表时间：16 February 2021

DOI：10.3390/vaccines9020159

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马立克氏病病毒 (Marek’s disease virus, MDV) 是一种高度传染性的α疱疹病毒，属于疱疹病毒科的狂欢病毒属。这种病毒引起的马立克氏病 (Marek’s disease, MD)，会造成免疫抑制、神经系统疾病以及内脏器官和皮肤中T细胞淋巴瘤的快速发作。接种疫苗是一种有效控制马立克氏病的措施。

较早的研究表明，从马立克氏病病毒中删除meq基因会形成一种减毒病毒。当鸡受到高毒力野毒株攻击时，该减毒病毒可以防御马立克氏病。但是，meq基因缺失的病毒依然能够明显地诱导鸡体内的淋巴器官萎缩。在另一项研究中，研究者发现vIL8基因的缺失导致接种疫苗的鸡丧失了体内淋巴器官萎缩的能力。来自得克萨斯农工大学的Lupiani博士和Sun博士等研究者依据上述的研究结果，在期刊上发表了文章，将缺失的meq和vIL8基因进行重组，生成新的马立克氏病病毒 (686BAC-?Meq?vIL8)。

实验材料和方法

作者采用两步的Red介导的重组程序，构建meq和/或vIL8单双缺失病毒，分别使用免疫荧光和免疫组织明升手机技术，测定体外生长活力，MDV基因组拷贝数，重新激活鸡体内的病毒，以及探讨了发病机理和免疫保护的效果。

结果与讨论

图1显示meq或vIL8单双缺失病毒的构建和体外表征 (686BAC-ΔMeq, 686BAC-ΔvIL8, 686BAC-ΔMeqΔvIL8)。RFLP结果表明，获得的模式与计算机分析预测的模式完全一致，而突变MDV基因组中没有意外的重排 (图1B)。图1C所示，使用PCR产物对meq和vIL8的manipu相关区域进行了测序，未检测到意料之外的突变。在感染了CEF的亲本和缺失突变病毒中，病毒蛋白pp38的表达和噬菌斑大小相似 (图1D)。此外，亲本686BAC，686BAC-ΔMeq，686BAC-ΔvIL8和686BAC-ΔMeqΔvIL8表现出相似的体外生长动力学 (图1E)，表明meq和/或vIL8的缺失不影响任何一种在细胞培养中的病毒的生长。

图1. (A) 血清 1型马立克氏病病毒 (MDV) 的基因组结构以及meq和vIL8基因的位置。(B) meq和/或vIL8缺失病毒的基因组分析。(C) PCR分析。(D) 免疫荧光法 (IFA)。(E) 体外生长动力学。

图2是体内复制和重新激活meq或vIL8单和双删除病毒。从图中可以看出，体内MDV基因组拷贝数数据和pp38表达结果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8显著减少了鸡体内的病毒复制，但是并不能消除FFE中的病毒复制。

图2. (1) meq和vIL8单和双缺失突变病毒的体内复制 (A) 和再激活 (B)。(2) meq和vIL8双重缺失病毒在已接种鸡的淋巴器官和毛囊上皮 (FFE) 中的复制。

关于meq或Vil8单双缺失病毒接种引起的淋巴器官萎缩和发病机理的评价，如图3A所示，与阴性对照鸡相比，亲本的为686BAC和686BAC-ΔMeq病毒，而不是686BAC-ΔvIL8和686BAC-ΔMeqΔvIL8病毒，在接种鸡中引起严重了法氏囊和胸腺萎缩。为了进一步评估686BAC-ΔMeqΔvIL8的致病特性，对所有接种和未接种的鸡进行了65天的严密监控。研究结果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8被完全衰减。

图3. (A) 淋巴器官萎缩。(B) 接种所示病毒或未接种对照组的鸡的存活曲线。

图4是meq和vIL8双重缺失病毒在MDV母鸡阴性 (Ab–) 和阳性 (Ab+) 鸡中的保护研究。结果表明，686BAC-ΔMeqΔvIL8可提供与CVI988相当的保护，可抵抗vv+ MDV的挑战。

图4. meq和vIL8双重缺失病毒在MDV母鸡阴性 (Ab–) 和阳性 (Ab +) 鸡中的保护研究。

结 论

体外研究表明，meq和vIL8双重缺失的重组病毒的复制水平与亲本极强毒病毒 (vv+) 相似。体内研究表明，在受到由极强毒病毒感染的马立克氏病病毒的攻击后，双重缺失的突变病毒 (686BAC-ΔMeqΔvIL8) 可提供与商业疫苗株CVI988同等水平的保护作用；与meq空病毒相比，可显著地减少鸡体内的淋巴器官萎缩。作者的研究支持双基因缺失/突变作为一种可用于产生下一代MD疫苗的新策略。

期刊简介

(ISSN 2076-393X, IF 4.086) 是一个国际型开放获取期刊。期刊主题涵盖疫苗，抗体，免疫等方面。采取单盲同行评审，一审周期约为13.6天，文章从接收到发表仅需3.4天。